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cc彩球网:【MK-1775】- cc彩球网 - 生物活性 - 靶点活性

发布时间:2018-12-06 20:40:12 编辑作者:活性达人

Adavosertib (MK-1775)图片

图片:Adavosertib (MK-1775)结构式

MK-1775,别名AZD1775或者Adavosertib,它是酪氨酸激酶WEE1的小分子抑制剂(IC50:5.2nM,无细胞试验中); 阻碍G2 DNA损伤检查点。MK-1775选择性地靶向并抑制WEE1,酪氨酸激酶磷酸化细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1,CDC2)以使CDC2 /细胞周期蛋白B复合物失活。它的化学中文名是2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-6-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基氨基)-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3(2h)-酮。那么它的生物活性是什么?如何做实验呢?下面让小编给您详细说明。

首先我们介绍MK-1775的生物活性:

1)体外活性
MK-1775增强了5-FU对p53缺陷型人结肠癌细胞的细胞毒cc彩球网。MK-1775抑制细胞中CDC2 Y15的磷酸化,消除由5-FU处理诱导的DNA损伤检查点,并通过诱导组蛋白H3磷酸化导致有丝分裂的过早进入[1]。MK-1775在p53缺陷细胞中消除了辐射诱导的G2阻滞,但在p53野生型细胞系中没有[2]。与p53缺陷肿瘤中的吉西他滨治疗相比,吉西他滨与MK-1775的组合产生强大的抗肿瘤活性并显着增强肿瘤消退反应(4.01倍)[3]。

2)体内活性
在体内,MK-1775以可耐受的剂量增强5-FU或其前药卡培他滨的抗肿瘤功效[1]。MK-1775(每天两次60mg / kg,p.o。)增强H1299异种移植肿瘤对分次放疗的反应[2]。与GEM处理的小鼠相比,MK-1775(30mg / kg,p.o。)使PANC198,PANC215和PANC185中的肿瘤生长退化[3]。

我们已经了解了MK-1775的生物活性,接下来如何做活性实验呢?一般来说,有如下的三种方法:

1)细胞实验
使用含有50 mM HEPES(pH 7.9),0.4 mol / L NaCl和1 mM EDTA的裂解液从细胞沉淀中提取总蛋白,并用10μL/ mL磷酸酶抑制剂混合物1,10μL/ mL磷酸酶抑制剂混合物强化 2,10μL/ mL蛋白酶抑制剂和1%NP-40。通过Bio-Rad蛋白质测定法测定裂解物的蛋白质浓度。通过12%SDS-PAGE分离等量的蛋白质并转移至Immobilon膜。

膜上的非特异性结合位点在含有0.1%吐温(TBS-T)的Tris(20mM) - 缓冲盐水(150mM,pH7.4)中的5%脱脂奶粉中封闭。通过将膜在5%脱脂奶粉中的一抗中的膜在4℃温育过夜,然后在合适的过氧化物酶缀合的二抗中孵育45分钟来检测蛋白质信号。然后通过在Typhoon 9400扫描仪上使用ECL加Western Blotting Detection Reagents的增强化学发光来显影膜。

2)动物实验
通过在10μL中接种1×106Calu-6细胞在腿中产生肿瘤异种移植物。当肿瘤直径达到8mm并持续5天时,开始照射和MK-1775治疗。使用由两个平行相对的137Cs源组成的小动物辐照器以5Gy / min的剂量率将γ射线局部递送至未麻醉小鼠的荷瘤腿。每天两次照射肿瘤,间隔6小时。在第一次每日辐射剂量之前1小时和之后2小时,通过管饲法给予MK-1775 0.1mL体积。

3)激酶实验
体外激酶测定:使用重组人Wee1。在增加浓度的MK-1775存在下,在30℃下,用10μMATP,1.0μCi[γ-33P] ATP和2.5μg聚(Lys,Tyr)作为底物进行激酶反应30分钟。将掺入基质中的放射性捕获在MultiScreen-PH板上,并在液体闪烁计数器上计数。

今天介绍了MK-1775的cc彩球网,并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述,MK-1775 是一种有效的 Wee1 抑制剂,IC50 值为 5.2 nM。它的靶点活性是Wee1,5.2nM。

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参考文献:
[1]. Hirai H, et al. MK-1775, a small molecule Wee1 inhibitor, enhances anti-tumor efficacy of various DNA-damaging agents, including 5-fluorouracil Cancer Biol Ther. 2010 Apr;9(7):514-22.
[2]. Bridges KA, et al. MK-1775, a novel Wee1 kinase inhibitor, radiosensitizes p53-defective human tumor cells. Clin Cancer Res. 2011 Sep 1;17(17):5638-48. Epub 2011 Jul 28.
[3]. Rajeshkumar NV, et al. MK-1775, a potent Wee1 inhibitor, synergizes with gemcitabine to achieve tumor regressions, selectively in p53-deficient pancreatic cancer xenografts.Clin Cancer Res. 2011 May 1;17(9):2799-806. Epub 2011 Mar 9.

相关化合物:Adavosertib (MK-1775)

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